科研服務

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實時熒光定量PCR實驗

相關知識:

聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測核酸分子的定性方法,而且也是一個能對核酸分子進行精確定量的有力工具。1996年,美國Applied Biosystems公司推出了一種新定量試驗技術——實時熒光定量PCR,它是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。

服務內容:

技術原理:

PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時,探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。

樣品準備條件:

細胞樣品:收集細胞后放入液氮中速凍保存或速凍24 h后轉入-80 °C冰箱保存;收集細胞后,視細胞量,直接加入1-1.5 mL Trizol溶解裂解細胞,再轉入-80 °C冰箱保存。

組織樣品:動物組織一般取材后立即放入液氮中速凍保存,液氮凍存24 h后可轉入-80 °C冰箱保存;組織樣品同樣可以采用Trizol溶解裂解后放入-80 °C冰箱保存。特殊組織(植物等)建議采用新鮮組織即刻提取RNA,逆轉合成cDNA后-20 °C保存備用。

所有樣品的處理和保存過程中,切忌反復凍融。

樣品運輸條件:樣品運輸條件根據實驗樣品的處理條件,可以選擇液氮或者干冰運輸。

服務內容:

         1)總RNA提取和質量檢測;
         2)RNA逆轉錄為cDNA;
         3)免費設計引物/探針,進行qPCR檢測,3個重復,內參免費,無需提供任何試劑;
         4)實驗數據整理和分析。

您只需提供:

新鮮且足量的樣品(組織不少于50 mg,細胞不少于106),或純化好的符合實驗要求的總RNA或cDNA(≥ 5 μg),檢測的基因信息,相關文獻等。

我們提供:

免費設計引物/探針,實驗報告單,qRT-PCR原始數據,擴增曲線,溶解曲線,數據分析結果等。

重要意義與應用:

無論是對遺傳疫?。ㄈ绲刂泻X氀脱巡。?、感染性疾?。ㄈ缂毦?、HBV、HPV、EBV、CMV、TB、支原體和衣原體等)以及腫瘤進行基因診斷,還是研究藥物對基因表達水平的影響,或者監控藥物和療法的治療效果,以及對食品及環境中菌群種類(如食品中污染的沙門氏菌)的檢測,實時熒光定量PCR技術都可以發揮很大的作用。

 

應用范疇:

  • 基因
  • 細胞
  • 微生物
  • 藥物

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