科研服務

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外泌體綜合研究方案

相關知識:

外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm),現今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體首次于綿羊網織紅細胞中被發現,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。

服務內容:

1)外泌體分離提取,包括血清、細胞培養上清、尿液等

2)外泌體鑒定,包括透射電鏡、流式細胞術、Western blot、納米顆粒示蹤等

3)外泌體基因、蛋白檢測分析技術(mRNA、miRNA、lncRNA、protein等)

4)細胞功能以及動物實驗驗證外泌體的功能

5)結合miRNA、lncRNA、功能蛋白等的研究方法檢測外泌體的生物學功能以及作用機制

應用范疇:

      外泌體綜合研究方案      

方案設計-思路優化-實驗協作-定期匯報
 
    維伯鑫生物是一家綜合的科研服務機構,可為科研工作者提供基因水平、蛋白質水平、細胞水平、組織病理檢測、動物實驗等實驗平臺。公司建立了標準化的實驗室,配備了先進的實驗儀器,可向廣大客戶朋友全程開放。同時,我司擁有數十位博士碩士專業技術人才,資深的技術老師確保全程解決方案優化調整及實驗質控,專業化的實驗人員也保證了實驗操作流程的規范性和實驗結果的價值。維伯鑫生物近年來主攻miRNA、lncRNA、circRNA、外泌體等研究方向,協作了多項國家自然科學基金重大項目、面上、地區、青年項目及各省市科技項目等,為廣大客戶朋友提供了優質的綜合解決方案,廣受好評。
 
   具體課題協作服務包括:                                 
 
    ? 實驗設計或優化: 您可以提供完整的課題思路交予我們進行評估優化(或簡化),或告訴我們您的研究方向和大致期望(影響因子等),我們的技術支持團隊會根據您的經費實際及相應要求梳理實驗方案;
 
   
 ? 實驗開展和匯報: 嚴格根據雙方協商確定的實驗方案進行實驗,我司有完善的實驗平臺和實驗技術人員專業協作;開展過程中,我們將每月定期向您匯報實驗的進展,讓您隨時了解您實驗的動態,以便根據實際情況及時調整實驗方案;

  
 ? 實驗報告與交流: 實驗結束后,我們將及時整理實驗結果,匯成實驗報告單,并協助分析原始數據,及時進行配合交流;

    ? 寫作指導與編譯: 我們將針對成稿困難的客戶進行專門指導,有需要的可提供翻譯、潤色等支持,以協助將科研成果更好更快的產出。
 
   外泌體綜合研究方案:          

       外泌體Exosome形成是由細胞膜內陷,形成內體,再形成多泡體,最后分泌到胞外。外泌體中攜帶有母細胞的多種蛋白質、脂類、DNA和RNA等重要信息,而非編碼RNA(包括miRNA、lncRNA、circRNA等)在調控基因表達等方面有著重要作用,對外泌體中的miRNA、lncRNA、circRNA進行研究不僅能夠深入了解疾病或不同發育階段的內在機制,而且篩選外泌體特異biomarker也有著非常高的臨床應用價值。隨著液態活檢及體外診斷技術的不斷發展,外泌體正在成為最新的疾病診斷標志物。

 

外泌體經典應用案例

外泌體與lncRNA研究案例
     案例:Takahashi KJ, Yan IK, Wood J, et al. Involvement of Extracellular Vesicle Long Noncoding RNA (linc-VLDLR) in Tumor Cell Responses to Chemotherapy. Mol Cancer Res. 2014 ,12(10): 1377–87. 

      研究人員通過對細胞間對話媒介外泌體中的lncRNA進行研究,在肝癌中發現了一個獨特的化療藥物應答及耐藥性產生的機制。通過外泌體運轉Linc-VLDLR到受體腫瘤細胞,使受體腫瘤細胞中Linc-VLDLR升高,進而通過調控下游變化使得機體產生耐藥性。

研究思路:

      通過芯片篩選發現lnc-VLDLR在HCC細胞外泌體比HCC細胞更富集。敲降Linc-VLDLR后細胞增殖marker PCNA表達下降,增殖能力下降?;熕幬锾幚鞮inc-VLDLR表達變化。加入不同濃度的外泌體,Linc-VLDLR的表達隨外泌體濃度增加而升高,敲降細胞中并沒有升高。 細胞實驗結果與此相符?;熕幬锾幚砗?,加入外泌體增加細胞活性,但敲降細胞的活性卻沒有增加。這說明外泌體能夠在化療藥物處理后通過運轉Linc-VLDLR調控細胞活性,并且可能是通過ABC轉運蛋白家族。

外泌體與circRNA研究案例

      案例:Li Y, Zheng QP, Bao CY, et al. Circular RNA is enriched and stable in exosomes: a promising biomarker for cancer diagnosis. Cell Res. 2015, 25(8):981-4.

      circular RNAs是一類廣泛存在的環狀閉合的非編碼RNA,可在體內調控基因的表達。外泌體是一類由細胞分泌的膜狀囊泡結構,其內部含有豐富的物質,包括miRNAs, lncRNA,和circRNAs。外泌體中是否能檢測到穩定存在的circRNA,能否作為疾病診斷的biomarker,該研究通過一系列實驗進行了探索。證明CircRNAs在外泌體中是表達豐富和穩定的,可以作為腫瘤檢測的潛在biomarker。

研究思路: 該研究首先對肝癌細胞系分離外泌體進行了circRNA檢測,表明細胞分泌外泌體中存在著豐富的circRNAs。隨后對健康人血清來源外泌體進行了檢測,表明血清外泌體中穩定的circRNAs是可能作為診斷biomarker。進一步的小鼠腫瘤模型和臨床直腸癌病人樣本血清外泌體的circRNAs檢測表明,檢測血清外泌體中的circRNA作為臨床診斷的biomarker是可行的。

外泌體與miRNA (miRNA in exosomes)

      案例1:Melo SA, Sugimoto H, O'Connell JT, et al. Cancer Exosomes Perform Cell-Independent MicroRNA Biogenesis and Promote Tumorigenesis. Cancer Cell, 2014.

      這篇文章中研究者采用Affymetrix microRNA 4.0芯片通過比對乳腺癌細胞株及正常細胞株內外泌體中microRNA的種類及含量發現兩者的表達譜系差異,并進一步發現外泌體內含有microRNA加工系統,能夠將前體microRNA加工為成熟microRNA,繼而研究者對外泌體內加工前體microRNA為成熟microRNA的各組分分別進行了研究,證實外泌體內有著成熟microRNA加工這一機制的存在。從癌細胞分泌的外泌體到達遠端后可以將其內加工成熟的microRNA釋放出來并使正常細胞轉化為癌變細胞,這一研究進一步揭示了癌癥演變中外泌體的作用并為Dicer成為潛在的腫瘤標志物提供了線索。
 
   服務流程:

 

 




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