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慢病毒包裝

相關知識:

在有關轉染的研究中,為了感染原代細胞和難感染的細胞系,研究者借助于病毒載體實現。由于慢病毒可以同時感染分裂和非分裂細胞、整合性以及免疫原性低等優點,目前在RNAi的研究中,基于慢病毒構建的shRNA被最廣泛的使用。而在RNAi研究需要長期觀察或者需要進行動物實驗時,基于慢病毒構建的shRNA的優勢更為明顯。

服務內容:

實驗流程:

1)根據目的基因相關信息(序列,序列號等),對每條目的設計3條siRNA序列,其中一條序列為陰性對照組;

2)根據設計好的siRNA序列,設計,合成兩條互補的短片段的DNA;

3)對合成好的DNA片段進行稀釋,退火,連接到線形化處理過的載體,轉化,涂平板,過夜培養;

4)通過 PCR的方法篩選陽性菌落,進行測序,分析測序結果;

5)對于測序正確的重組質粒,提取和純化高質量的不含內毒素的 siRNA病毒穿梭質粒;

6)利用構建好的質粒做轉染實驗,48小時后通過實時熒光定量和Western的方法分析目的基因,篩選出一條最有效的siRNA序列;

7)篩選出的高效重組載體和病毒包裝質粒共轉染 293T細胞,進行病毒包裝和生產,收集病毒液;

   8)濃縮、純化病毒液,測定滴度。

慢病毒包裝流程

您只需提供:

靶基因信息。

我們提供:

慢病毒包裝實驗報告單,提供1*108TU/ml病毒(1 ml),對照病毒(200 μl)等。

應用范疇:

  • 基因
  • 細胞
  • 微生物
  • 藥物

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